ELISA試劑盒中載體的資料許多,zui常用的是聚苯乙烯。
聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的功用,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留本來的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被遍及選用。
聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。
ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。
聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附功用特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附功用增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
操控反響條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8擺布。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。
與聚苯乙烯相似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特征為質(zhì)軟板薄,可剪割,價(jià)廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。
聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附功用比聚苯乙烯高,但空白值也略高。
ELISA試劑盒出色的ELISA板應(yīng)該是吸附功用好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間功用鄰近。
聚苯乙烯ELISA板由于質(zhì)料的不相同和制作技能的不相同,各種產(chǎn)品的質(zhì)量區(qū)別很大,因此,每一批號(hào)的ELISA板在運(yùn)用前須事前查看其功用。常用的查看方法為:以一定濃度的人IgG(通常為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗刷后每孔內(nèi)參加恰當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗刷,加底物顯色,中止酶反響后,分別測(cè)每孔溶液的吸光度。
固相載體在ELISA測(cè)定過程中作為吸附劑和容器,不參加化學(xué)反響。
為便于作少量標(biāo)本的查看,有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,巨細(xì)與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。
一切單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。
ELISA板的特征是可以一同進(jìn)行許多標(biāo)本的查看,并可在特制的比色計(jì)上靈敏讀出效果。
在哪一種載體上陽性效果與陰性效果不相同zui大,這種載體便是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。
現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA查看,包括加樣、洗刷、保溫、比色等過程,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
ELISA試劑盒為比照不相同固相在某一ELISA測(cè)定中的好壞,可應(yīng)用如下的實(shí)驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不相同的固相載體上按預(yù)訂的ELISA操作過程進(jìn)行測(cè)定,然后比照效果。
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